Biosharp BL698A Fluorescente Quantitative PCR Kit (5X1mL)
Introduzione del produttore:
Biosharp BL698A Fluorescente Quantitative PCR Kit (SYBR Green qPCR Mix)
Marca:biosharp
Numero di articolo:BL698A
Specifiche:5X1mL
Questo prodotto è realizzato utilizzandoSYBR Green IMetodo di fluorescenza chimericaReal Time PCRReagenti speciali per avviamento a caldoTaq DNAPolimerasidNTP、SYBR Green IPronto all'uso una volta che i reagenti sono pre-miscelati2x Mix, può colpirecDNAEseguire un rilevamento quantitativo rapido e altamente specifico. Questo prodotto è chimicamente modificatoHot Start Taq DNAPolimerasi, in50 ℃Il seguente è inattivo, solo95 ℃In determinate condizioni, l'attività dell'enzima può essere completamente ripristinata solo dopo il riscaldamento, ZRidurre al minimo la produzione di prodotti di amplificazione non specifici e migliorare la quantificazione della fluorescenzaPCRLa precisione della reazione. Il buffer di reazione unico di questo kit può ottenere buoni risultati di amplificazione in un ampio intervallo, sensibilità di rilevamento più elevata e segnale più forte.
Componenti del prodotto:
numero del prodotto |
Nome del prodotto |
specifiche |
1 |
Mix qPCR verde 2×SYBR |
5x1ml |
2 |
Tintura di riferimento 50×ROX |
1ml |
condizioni di conservazione:
Dopo aver ricevuto questo prodotto, si prega di posizionarlo immediatamente-20℃Conservare al buio, valido per un anno,2~8℃Stoccaggio in condizioni6Mese,Evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento.
istruzioni:
1,PreparazioneReal-Time PCRSistema di reazione:
1Raccogliere tutti i reagentiMix qPCR verde 2×SYBR,ROX Reference DyeModelli, primer eRNase-Free ddH2OSciogliere e mescolare accuratamente a temperatura ambiente,Evitare di generare bolle.Dopo una breve centrifugazioneposto su ghiaccioPreparare la soluzione di reazione secondo la tabella sottostante.
Fare riferimento alla tabella seguente per preparare il sistema di reazione:
componente |
20ulsistema |
concentrazione finale |
SYBR Green qPCR Mix |
10 μl |
1× |
Primer F (10 μM)* |
0,4~0,8 μl |
0,2~0,4 uM |
Primer R (10 μM)* |
0,4~0,8 μl |
0,2~0,4 uM |
50 x colorante di riferimento ROX** |
- |
- |
cDNAmodello |
- |
-- |
RNase-Free ddH2O |
a20 μl |
- |
* In generale, la concentrazione finale di primer nel sistema di reazione è0,2 uMSi può ottenere un migliore effetto di amplificazione. Quando la prestazione di reazione è scarsa, può essere raggiunta alla concentrazione finale0,2~0,4 uMRegolare la concentrazione del primer all'interno dell'intervallo.
** Z adattabilità di diversi strumenti comuniROX Reference DyeLa concentrazione è indicata nella tabella seguente:
Modello dello strumento |
ppm |
ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/StepOne/StepOnePlusclasse |
5× |
ABI 7500/7500 Fast、QuantStudio ® 3/5、QuantStudio 6/7 Flex、ViiA 7、Stratagene Mx3000P/Mx3005PeMx4000Aspetta. |
1× |
Roche、Bio-Rad、EppendorfAspetta. |
Non è necessario aggiungere |
2Tubo di reazione coperto o sigillato/PCRPiastra, mescolare delicatamente. Breve centrifugazione per assicurare che tutti i componenti siano in tubo/Il fondo della tavola.
II. EseguireReal-Time PCRReazione
1、Propone un metodo in due fasiPCRprocedure di reazione.
Procedura di reazione in due fasi:
Passi |
temperatura |
Durata |
Numero di cicli |
Preditività |
95℃ |
5min |
1 |
deformazione |
95℃ |
10sec |
40 |
Raccolta estesa dei dati |
60℃ |
30sec |
40 |
Analisi della curva di fusione |
Impostazione secondo la procedura raccomandata dello strumento |
QuandoFattori come la bassa quantità di modelli causano scarsa amplificazione, che può essere eseguita utilizzando una procedura in tre passaggiPCRReazione.
Procedura di reazione in tre fasi:
Passi |
temperatura |
Durata |
Numero di cicli |
Preditività |
95℃ |
5min |
1 |
deformazione |
95℃ |
10sec |
40 |
Incendio |
50-60℃ |
30sec |
40 |
Raccolta estesa dei dati |
72℃ |
30sec |
40 |
Analisi della curva di fusione |
Impostazione secondo la procedura raccomandata dello strumento |
2、Rilevamento a bordo: mettere il sistema di reazione in fluorescenzaPCREseguire il programma per raccogliere i dati e analizzare i risultati.
Biosharp BL698A Kit di fluorescenza per PCR quantitativa (5X1mL)