Cromatografia liquida ultraveloceProminenece UFLC

L'analisi rapida è sempre stata utilizzata come argomento tecnico importante, ma con la rapida diffusione di LCMS, il miglioramento del rapporto qualità-prezzo è diventato un problema urgente e un fattore importante per accelerare l'accelerazione.
L'analisi rapida riduce il tempo di analisi, di solito riducendo la colonna cromatografica o aumentando il flusso della fase di flusso. Tuttavia, utilizzando una colonna di riempimento comunemente utilizzata con una dimensione di particelle di 5 μm, le prestazioni di separazione diminuiscono notevolmente con qualsiasi metodo, rendendo l'accelerazione inutile.
Pertanto, sono stati sviluppati i seguenti due metodi:
• Utilizzare riempimenti di piccole dimensioni
Con questo metodo sarà possibile una rapida separazione. Tuttavia, a causa dell'aumento della resistenza al flusso nella colonna cromatografica, anche la pressione subita dai componenti dello strumento e dalla colonna cromatografica aumenterà significativamente.
• Separazione ad alta temperatura
Le temperature più elevate accelerano la diffusione della sostanza, riducono la resistenza al flusso nella colonna cromatografica e consentono una separazione rapida. L'analisi ad alta temperatura è efficace nella riduzione della pressione della colonna, ma le alte temperature causano il deterioramento della colonna cromatografica, causano la decomposizione del campione e altre carenze che richiedono attenzione durante l'applicazione.
Per risolvere il problema della retropressione, sono stati sviluppati strumenti speciali per migliorare la capacità di supporto della pressione, che sono spesso più costosi. Tuttavia, questi strumenti dedicati hanno dovuto fare compromessi in termini di prestazioni di campionamento e sensibilità. Inoltre, le colonne di riempimento di riempimento troppo sottilizzate richiedono elevati requisiti per l'hardware e l'analisi sviluppata utilizzando questa colonna cromatografica sacrifica la versatilità. Pertanto, se questo strumento viene utilizzato in analisi HPLC convenzionali, la sua efficienza sarà inferiore.
Prominence supporta la separazione rapida
Prominence utilizza componenti standard che soddisfano le esigenze dei ricercatori sia per l'analisi tradizionale che per l'analisi ad alta velocità, ma anche per supportare temperature di funzionamento fino a 85 ° C, rendendo così possibile analisi rapide a basse pressioni, mentre lo strumento mostra prestazioni analitiche e livelli di flusso meno comuni anche in configurazioni di strumenti più costose.
Prominence UFLC supporta l'analisi rapida grazie alle seguenti caratteristiche:
• Piccoli tubi a colonna e bassini di circolazione di piccolo volume riducono l'effetto di espansione del picco esterno alla colonna.
• Utilizzare una colonna cromatografica Shim-pack XR-ODS con dimensioni di particelle di 2,2 μm.
Shim-pack XR-ODS è una nuova generazione di colonne cromatografiche di analisi rapida che prende in considerazione la sottilizzazione del riempimento sopra descritto e trova un equilibrio abile tra efficienza di separazione e pressione per migliorare o mantenere l'effetto di separazione riducendo al contempo i tempi di analisi.

Chromatographic conditions; column: described above, mobile phase: water/acetonitrile (3/7,v/v), flow rate: described above, temperature: 40 ℃, detection: absorbance at 245 nm, sample volume: 4μL(XR-ODS), 10μL(VP-ODS).
Peaks; 1: actophenone, 2: propiophenone, 3: butyrophenone, 4: balenophenone, 5: hexanophenone, 6: heptanophenone, 7: octanophenone.
• Il campionatore automatico Prominence SIL-20A consente un campionamento ultraveloce di 10 μl in 10 secondi.

Chromatographic conditions; column: Shim-pack XR-ODS(3mm i.d.×30 mm, 2.2μm), mobile phase: water/acetonitrile(4/6 to 2/8 in 0.4 min, convex gradient), flow rate: 3mL/min, temperature: 80 ℃, detection: absorbance at 245 nm, sample volume: 4μL(each 800 nm ol),.0.1 min delayed injection.
Peaks; 1: actophenone, 2: propiophenone, 3: butyrophenone, 4: balenophenone, 5: hexanophenone, 6: heptanophenone, 7: octanophenone.
• Supporta analisi ad alta temperatura fino a 85°C.
Temperatura e analisi rapida: con l'aumento della temperatura della colonna, il numero di pannelli teorici aumenta, l'effetto della colonna aumenta e la pressione della colonna diminuisce.

Chromatographic conditions;
mobile phase:　water/acetonitrile (3/7, v/v),
detection: absorbance at 245 nm.
Picchi: 1: Fenilenacetone 2: Fenilenacetone 3: Fenilenbutone 4: Fenilenpentone 5: Fenilenhexone 6: Fenilengentone 7: Benzinone
L'effetto della temperatura sui composti: l'analisi ad alta temperatura è efficace nella riduzione della pressione della colonna, ma le alte temperature causano il deterioramento della colonna cromatografica, causano la decomposizione del campione e altre carenze che richiedono attenzione durante l'applicazione. L'analisi ad alta temperatura è utilizzata solo come strumento ausiliario per l'analisi rapida.
• Rilevatori con alta frequenza di campionamento che consentono l'acquisizione rapida dei dati senza perdere informazioni.
• Software dedicato alla conversione dei metodi cromatografici che rende la conversione delle condizioni cromatografiche convenzionali in condizioni UFLC semplice e facile da eseguire, garantendo la versatilità dei metodi di analisi.

Riproducibilità dell'analisi rapida
La riproducibilità dei tempi di conservazione dei componenti in separazione rapida è più difficile rispetto all'analisi convenzionale. La riproducibilità del tempo di conservazione (RSD) e la radicazione quadrata del tempo aumentano in proporzione inversa, quindi richiedono prestazioni di distribuzione più rigorose rispetto alle analisi convenzionali. Prominence UFLC garantisce un'eccellente capacità di somministrazione a microstroke con una risoluzione di somministrazione di 3 nL/min e una risposta controllata di 0,1 secondo durante la somministrazione a gradiente per una riproducibilità di tempo di conservazione estremamente superiore.

Che cos'è High Flow?
L'obiettivo della cromatografia liquida rapida è un flusso elevato, ovvero più campioni vengono analizzati ogni giorno o ogni ora. Per raggiungere un flusso elevato, non solo il tempo di analisi del singolo campione deve essere ridotto, ma anche l'intero ciclo di campionamento e analisi deve essere ottimizzato. L'obiettivo dell'accelerazione non è solo quello di ridurre il tempo di analisi, ma anche il ciclo di analisi. La velocità di iniezione del campione Prominence UFLC è di 10 secondi, riducendo notevolmente il ciclo di analisi.

Esempi di applicazione

Analisi UFLC degli amminoacidi derivati PTC

L'analisi degli amminoacidi ha due metodi di rilevamento, uno è il metodo di derivazione post-colonna dopo la separazione con colonna di cromatografia di scambio ionico, per la derivazione e il nuovo rilevamento, l'altro è il metodo di derivazione pre-colonna dopo la derivazione, per la separazione con colonna di cromatografia in fase inversa. Dal punto di vista dell'analisi rapida, la derivativa pre-colonna è efficace. In questo caso, l'analisi degli amminoacidi è stata effettuata in un tempo più breve utilizzando Shim-pack XR-0DS.
La derivativa viene effettuata utilizzando isocianato di fenile. La derivazione post-colonna richiede 1 ora, mentre la derivazione pre-colonna richiede 25 minuti di analisi che possono essere ridotte a 4 minuti quando si utilizzano colonne cromatografiche convenzionali.

Analisi UFLC dei pigmenti

I coloranti aggiunti agli alimenti sono composti sintetici e naturali, che sono altamente solubili in acqua e vengono analizzati con HPLC. Ma quando più combinazioni di coloranti sono fatte, l'analisi contemporanea richiede molto tempo. Ecco un esempio di analisi simultanea del pigmento con Shim-pack XR-ODS Ultra-Fast LC. Il risultato dell'analisi contemporanea di 12 pigmenti componenti è il seguente cromatografico. Il tempo necessario per l'analisi con LC convenzionale è di 50 minuti, mentre con LC ultraveloce, l'analisi si conclude in circa 6 minuti.

Analisi UFLC degli idrocarburi aromatici policiclici (PAH)

I PAH sono sostanze chimiche che determinano il grado di inquinamento atmosferico da gas di scarico come veicoli. I PAH sono altamente cancerogeni, quindi il monitoraggio atmosferico di queste sostanze è un importante elemento di misurazione. I PAH mostrano una forte fluorescenza e possono essere utilizzati per analisi ad alta sensibilità con rilevatori di fluorescenza.
Per l'analisi di questi 10 PAH, in uno stato di separazione senza perdita, l'UFLC ha raggiunto un'analisi accelerata 10 volte più veloce (tempo di analisi 5 minuti) rispetto alla LC convenzionale (tempo di analisi 50 minuti).